目的：观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)活化及细胞外基质分泌的影响,并初步探讨其机制。方法：实验一：AngⅡ与Ang-(1-7)最佳作用浓度及作用时间确定。(1)确定AngⅡ引起NRK-49F细胞活化的最佳作用浓度及作用时间。体外传代培养NRK-49F细胞,调整细胞密度为1×105/ml,接种于六孔板中,按以下分组分别干预24h、48.h、72h,细胞免疫化学染色法检测细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,确定AngⅡ引起NRK-49F细胞活化的最佳作用浓度及作用时间。实验分组：①对照组；②AngⅡ10-7mol/L组；③AngⅡ10-6mol/L组；④AngⅡ10-5mol/L组；实验结果表明以含AngⅡ10-6mol/L的培养基干预72h活化细胞最佳。(2)确定Ang-(1-7)抑制AngⅡ引起的NRK-49F细胞活化的最佳作用浓度。以上述相同方法将NRK-49F细胞接种于六孔板中,再以含AngⅡ10-6mol/L和不同浓度Ang-(1-7)的培养基按以下分组培养细胞：①AngⅡ+Ang-(1-7)10-7mol/L组；②AngⅡ+Ang-(1-7) 10-6mol/L组；③AngⅡ+Ang-(1-7) 10-5mol/L组;培养72h后同样以细胞免疫化学染色法观察不同浓度Ang-(1-7)对AngⅡ诱导的NRK-49F细胞活化的影响,确定Ang-(1-7)抑制AngⅡ引起的NRK-49F细胞活化的最佳作用浓度。实验结果表明Ang-(1-7)10-5mol/L对AngⅡ诱导的细胞活化抑制最佳。实验二：Ang-(1-7)对AngⅡ诱导的NRK-49F细胞活化的影响。以含AngⅡ终浓度为10-6mol/L,Ang-(1-7)终浓度为10-5mol/L的培养基按以下分组培养细胞①对照组：细胞培养基中不加干预因素；②AngⅡ组：细胞培养基中加入AngⅡ;③Ang-(1-7)组：细胞培养基中加入Ang-(1-7)；④AngⅡ+Ang-(1-7)组：细胞培养基中同时加入AngⅡ和Ang-(1-7)。按上述分组培养72h后,进行如下检测：①应用细胞免疫化学染色法检测α-SMA及细胞因子转化生长因子β1 (TGF-β1)、胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)的表达；②应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中细胞外基质成分工型胶原(ColⅠ)和细胞因子TGF-β1、IGF-Ⅰ的含量；结果：实验一(1)：AngⅡ引起NRK-49F细胞活化的最佳作用浓度及作用时间。对照组细胞只有基础量的α-SMA表达,随培养时间的延长α-SMA的表达无明显变化(P＜0.05)；其余AngⅡ干预组细胞α-SMA的表达随AngⅡ浓度升高,干预时间的延长而增加。72h后,AngⅡ10-6mol/L干预组α-SMA表达最强,但与AngⅡ10-5mol/L干预组的差别无统计学意义(P>0.05)。(2)Ang-(1-7)抑制AngⅡ引起的NRK-49F细胞活化的最佳作用浓度。培养72h后,NRK-49F细胞α-SMA的表达随Ang-(1-7)浓度升高而减少,各组间差异均具有统计学意义(P＜0.05)。AngⅡ10-6mol/L+Ang-(1-7) 10-5mol/L干预组细胞α-SMA表达最少。实验二：(1)细胞免疫化学检测结果：①肾间质成纤维细胞活化标志物α-SMA表达的变化：培养72h后,对照组只有基础水平的α-SMA表达,Ang-(1-7)组与之类似；AngⅡ组细胞α-SMA表达较对照组显著增加(P＜0.05),AngⅡ+Ang-(1-7)组与,AngⅡ组比较,细胞α-SMA表达明显减少(P＜0.05)；②细胞因子TGF-β1、IGF-Ⅰ表达的变化1:培养72h后,对照组细胞几无TGF-β1、IGF-Ⅰ阳性表达,Ang-(1-7)组与之类似；AngⅡ组细胞与对照组比较,TGF-β1、IGF-Ⅰ表达显著增加(P<0.05), AngⅡ+Ang-(1-7)组与AngⅡ组比较,细胞TGF-β1、IGF-I表达明显减少(P<0.05)。(2)ELISA检测结果：培养72h后,Ang-(1-7)组与对照组比较,细胞上清液中ColI和TGF-β1、IGF-Ⅰ的含量无明显改变,AngⅡ组与对照组比较,细胞上清液中ColⅠ和TGF-β1、IGF-Ⅰ明显升高(P<0.05)；与AngⅡ组比较,AngⅡ+Ang-(1-7)组细胞上清液中ColⅠ和TGF-β1、IGF-Ⅰ含量明显减少(P<0.05)。结论：(1)Ang-(1-7)能抑制AngⅡ诱导的肾间质成纤维细胞活化；(2)Ang-(1-7)可能通过抑制TGF-β1、IGF-Ⅰ分泌而发挥作用。
