乙型肝炎病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒,是一种严重危害人类健康的致病因子,据统计,全世界HBsAg的携带者可达两亿人。在我国,它是导致肝炎、肝硬化、肝癌的主要原因。X基因是HBV基因组中最小的开放读码框,它编码一条154个氨基酸残基的蛋白,分子量约16.5kD。X蛋白参与机体多种调节功能,包括蛋白质翻译、细胞应答、信号转导路径;还可影响DNA修复、细胞循环调控及凋亡;X蛋白使病毒的易感性增强,并在慢性HBV感染者导致肝细胞癌的过程中发挥了重要的作用。 为研究乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因12(XTP12)在HBV感染后病毒致病过程中的作用,我们以分子生物学技术构建XTP12的真核表达载体pcDNA3.1(-)-XTP12,以表达质粒pcDNA3.1(-)-XTP12转染HepG2细胞,并以空载体pcDNA3.1(-)做为平行对照,制备转染后的细胞裂解液。应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,构建XTP12激活相关基因差异表达的cDNA消减文库,筛选相关的靶基因片段,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆,PCR扩增后进行测序及同源性分析。对转染后的细胞裂解液同时应用基因表达谱芯片技术对差异表达mRNA进行检测和分析。筛选到一些与细胞信号转导、细胞生长调节、蛋白质翻译合成、物质代谢、免疫调节及肿瘤发生密切相关的蛋白编码基因,推测了HBxAg在体内可能存在的调控机制的线索。
