目的利用胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase, ChAT),突触蛋白1 (synapsin 1, SYP1)免疫组化及Western Blot技术检测,ChAT、胆碱乙酰酯酶(acetylcholinesterase, AchE)、孕烯醇酮(pregnenolone, PREG)试剂盒检测,探讨PREG干预对老年大鼠不同脑区胆碱能系统功能及突触蛋白表达的作用。方法24月龄雄性SD大鼠40只,随机分为空白对照组、溶剂对照组、小剂量PREG (0.5mg/Kg)干预组、大剂量PREG (2.0mg/Kg)干预组,隔日腹腔注射干预一个月。干预结束后第2天,分别处死不同处理组大鼠,分离相应区域脑组织,低温保存备检查使用。部分采取新鲜脑组织(额叶、颞叶、海马)Western Blot技术检测各组不同脑区ChAT、SYP1,并对灰度值进行比较；采用试剂盒检测血浆PREG及不同脑区脑组织ChAT、AchE活性变化；部分制备脑组织石蜡切片,免疫组化技术检测额叶、海马ChAT、SYP1,采用图像分析技术分析比较阳性表达产物的半定量变化。结果1.Western Blot检测显示,大剂量PREG干预组的老年大鼠额叶、颞叶、海马区域ChAT、SYP1表达增加,差异有统计学意义(P<0.05),小剂量PREG干预组ChAT、SYP1表达变化无统计学意义(P>0.05)。2.免疫组化显示,大剂量PREG干预组的老年大鼠额叶、颞叶、海马区域ChAT, SYP1免疫阳性产物增加,差异有统计学意义(P<0.05),小剂量PREG干预组ChAT、SYP1免疫阳性产物变化无统计学意义(P>0.05)。3.ELISA测定显示,大剂量PREG干预组的老年大鼠AchE活性下降,ChAT活性升高,血浆PREG含量升高(P<0.05)；小剂量PREG干预组血浆PREG含量升高,但其他指标与空白对照组相比均无明显变化。结论大剂量PREG干预可以明显提高老年大鼠脑内额叶、颞叶、海马区域胆碱能系统功能活性,同时也可以明显增加额叶、颞叶、海马区域SYP1表达。实验的结果提示,PREG可能有助于明显改善老年大鼠的记忆相关脑区的突触可塑性,明显提高老年大鼠的记忆相关脑区的胆碱能功能活性,进而有助于改善大鼠的学习与记忆功能。
