肾盂尿蛋白和肾动态显象在评价肾积水肾损害程度中的实验研究

目的：①探索建立一种较为理想的、可复性强的输尿管部分梗阻的动物模型。②研究肾盂尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）、视黄醇结合蛋白（RBP）、白蛋白（Alb）和肾动态显象在评价单侧输尿管部分梗阻所致肾损害程度评价中的临床意义③观察部分梗阻引起的肾积水、肾功能损害及肾纤维化的程度。方法：将50只雄性新西兰大白兔随机分组，假手术组（对照组）10只，只分离出左侧输尿管上段后直接关腹，手术入路选取背部肋弓下脊柱旁开2cm的纵行切口；手术组40只，分离出左侧输尿管后，将一根长约lcm内径1mm左右的聚乙烯塑料管纵形剖开，在肾盂输尿管连接部下约lcm处把输尿管套人其中，两端用1号丝线结扎固定。还原输尿管后缝合手术切口。手术组分A、B、C、D四个组，每组随机分配10只，分别于手术后的1、2、4、8周后行肾动态显像检测GFR，并收集左侧肾盂尿液检测Alb、NAG、RBP、Cr的含量。对照组8周后检测各项指标和行肾动态显像检查，结果应用图像分析系统进行半定量分析。实验结果均以均数±标准差((X|-)±ｓ)表示，各组间比较采用单因素方差分析，应用SPSS16.0统计分析软件对实验数据进行统计学处理，P<0.05为有统计学意义。肾动态显像检查和尿液标本采集完后，处死动物，取出积水肾脏，放入固定液中，做病理切片，并采用HE、Masson染色，观察肾脏细胞凋亡与纤维化程度。结果：A、B、C、D组积水肾盂尿中NAG水平较对照组明显增加（P<0.05），随着梗阻时间的增加，各组NAG水平A组<B组<C组<D组，且都具有统计学意义（P<0.05）。A组肾盂尿中Alb、RBP的水平无明显变化（P>0.05），B组、C组、D组中尿液中含量增加明显。Alb、RBP经过内生肌酐校正后，A组RBP/Cr与对照组相比有明显差异（P<0.05），Alb/Cr和对照组相比无差异（P>0.05）。A组梗阻肾GFR水平较对照组相比无明显改变，B、C、D组有明显差异（P<0.05）,且随着梗阻时间增加GFR水平进行性下降。HE、Masson染色示:对照组,肾组织结构形态正常。A组部分肾小管有轻微的扩张，上皮细胞出现肿胀；B组远曲小管和集合管扩张更明显，肾小管上皮细胞出现空泡变性且病变范围增大，肾小管间质出现炎性细胞浸润，肾小球细胞出现肿胀、变性；C组部分肾小管萎缩、管腔塌陷，大量炎性细胞浸润，肾间质增宽、基质成分增多，纤维组织增生，出现部分肾小球萎缩；D组肾小管间质纤维化更加明显，绝大部分肾小管毁损、结构消失，萎缩的肾小球数量增加。结论①本实验通过对采用输尿管套管法建立输尿管部分梗阻动物模型，方法简便，梗阻易于解除，梗阻程度可以控制，完全符合输尿管不全梗阻的要求，有很好的可重复性，是一种理想的可逆性输尿管不全梗阻动物模型；手术方式采用腰背部入路，操作简单，对实验动物肠道影响小，术后生存率高，手术方式切实可行。②肾盂尿NAG/Cr、RBP/Cr在梗阻早期GFR尚未发生改变时增高，说明梗阻性肾病肾小管最先发生损害，NAG/Cr、RBP/Cr可以反映不全梗阻肾在不同病变阶段的肾功能改变情况，尤其是在肾功能改变早期，肾小球滤过率还没有改变的时候可以评价肾功能的损害程度；尿mAlb/Cr可以反映肾小球损伤的程度，与GFR有很好的相关性。所以的输尿管插管留取病肾肾盂尿检测NAG、RBP、mAlb，三者相结合可作为输尿管梗阻至肾积水肾功能损害程度的指标。③输尿管梗阻初期，肾脏水肿、体积增大，梗阻1周时肾盂与输尿管扩张明显；梗阻4周时肾皮质开始变薄，以后逐渐加重；镜下早期可见肾小管管腔扩张、上皮细胞扁平化，间质出现纤维化；8周部分肾小管萎缩、结构辨认不清；梗阻2周时肾小管间质出现纤维蛋白原沉积，梗阻时间越长造成肾间质纤维化越重，肾小管萎缩愈明显，实质细胞凋亡愈明显。输尿管梗阻后肾小球滤过功能进行性下降，尿液浓缩功能受损逐渐加重。随着梗阻后肾盂内压的持续升高、肾小管萎缩及肾间质纤维化而出现肾功能损害。