尿酸减轻鱼藤酮对PC12细胞损伤作用及机制的研究

第一部分尿酸减轻鱼藤酮对PC12细胞的损伤作用目的：评价尿酸减轻鱼藤酮诱导PC12细胞的损伤作用。方法：采用PC12细胞制作鱼藤酮损伤的帕金森病细胞模型，分为对照组、鱼藤酮组、尿酸组和尿酸+鱼藤酮组。药物作用24h后，采用比色法检测细胞外乳酸脱氢酶（LDH）活力；光学显微镜下观察细胞形态；Hoechst33342染色检测PC12细胞的凋亡率；Annexin V-PI双染色检测凋亡细胞。结果：0.1-5μmol/L鱼藤酮对PC12细胞作用24h后LDH释放显著增加（267.33±44.79U/Lvs189.75±37.50U/L，303.04±34.01U/L vs189.75±37.50U/L，380.25±28.38U/L vs189.75±37.50U/L，436.52±29.32U/L vs189.75±37.50U/L，500.19±32.36U/L vs189.75±37.50U/L，563.35±42.33U/L vs189.75±37.50U/L，P<0.05）；1μmol/L鱼藤酮作用于PC12细胞24h后，与对照组比较，Hoechst33342染色及Annexin V-PI染色细胞凋亡率细胞凋亡率显著增多（P<0.05），50-400μmol/L尿酸加入PC12细胞24h后，与对照组相比各项指标均无统计学差异（P>0.05）。50-400μmol/L尿酸+1μmol/L鱼藤酮组与1μmol/L鱼藤酮组相比较，LDH释放量显著降低（367.02±15.71U/L vs464.43±20.26U/L，329.56±15.79U/L vs464.43±20.26U/L，299.65±26.37U/L vs464.43±20.26U/L，284.70±21.18U/L vs464.43±20.26U/L，P<0.05），200μmol/L尿酸+1μmol/L鱼藤酮组与1μmol/L鱼藤酮组相比较Hoechst33342染色及Annexin V-PI染色细胞凋亡率细胞凋亡率显著减少（P<0.05）。结论：尿酸对鱼藤酮诱导PC12细胞的损伤具有保护作用。第二部分尿酸减轻鱼藤酮对PC12细胞损伤作用的机制研究目的：探讨尿酸减轻鱼藤酮介导的PC12细胞损伤作用的机制。方法：应用鱼藤酮建立PC12细胞损伤模型，分为对照组（DMSO组）、鱼藤酮（1μmol/L）组、尿酸（200μmol/L）组和尿酸（200μmol/L）+鱼藤酮（1μmol/L）组。鱼藤酮作用24h后，比色法测定超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽（GSH）的活性变化；流式细胞仪检测线粒体膜电位变化；蛋白印迹法检测从线粒体释放到胞浆中的细胞色素c的水平。结果：1μmol/L鱼藤酮作用于PC12细胞24h小时后，与对照组相比，SOD活性显著下降（10.40±0.76U/L vs20.62±0.37U/L，P<0.05），GSH含量显著降低（1.86±0.71μmol/g pro vs7.67±1.38μmol/g pro，P<0.05），线粒体的膜电位下降（0.66±0.03%vs1±0.06%，P<0.05），线粒体内释放到胞浆中细胞色素c的水平增高（0.74±0.14vs0.11±0.11，P<0.05）。200μmol/L尿酸组与对照组相比各项指标均无统计学差异（P>0.05）；200μmol/L尿酸+1μmol/L鱼藤酮组与1μmol/L鱼藤酮组相比较，SOD活性升高（17.40±0.28U/L vs10.40±0.76U/L， P<0.05），GSH活性水平增高（5.95±0.38μmol/g pro vs1.86±0.71μmol/g pro，P<0.05），线粒体膜电位增高（0.80±0.09%vs0.66±0.03%，P<0.05），线粒体内释放到胞浆的细胞色素c水平减低（0.49±0.12vs0.74±0.14， P<0.05）。结论：尿酸能够明显减轻鱼藤酮介导的PC12细胞的SOD和GSH活性及线粒体膜电位的降低，并能减轻线粒体内释放到胞浆的细胞色素c水平的增高。