目的通过检测缺氧性损伤大鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cell,RTEC)抗增殖蛋白-1(Prohibitinl,PHBl)和抗增殖蛋白-2(Prohibitin2,PHB2)的表达,初步探讨PHB1和PHB2在缺氧性RTEC损伤中的作用。方法以体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞系(NRK-52E)为研究对象,NRK-52E细胞置于5%C02,37℃培养箱中孵育至80%传代后随机分为2组：正常组和模型组,正常组NRK-52E细胞继续培养,模型组NRK-52E细胞置于真空干燥罐中,负压吸引器抽尽残余空气,充以配好的缺氧气体(含体积分数为95%N2和5%C02),密封的方法建立缺氧性RTEC损伤模型,分别于造模后第12、24、36小时对相关指标进行检测,应用扫描电镜观察细胞形态,比色法检测细胞培养上清液丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测NRK-52E细胞PHB1、PHB2、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1) mRNA表达,免疫印迹法(Western blot)检测NRK-52E细胞PHB1、PHB2的蛋白表达。结果1.与正常组比较,模型组NRK-52E细胞各时间点：(1)NRK-52E培养上清液MDA含量、细胞凋亡率均显著增高(p<0.05),缺氧时间越长,MDA含量和细胞凋亡率越高。(2)NRK-52E细胞的PHB1、PHB2蛋白及其mRNA表达均显著降低(p<0.05),缺氧时间越长,表达越低。(3)NRK-52E细胞的TGF-β1mRNA表达均显著增高(p<0.05),缺氧时间越长,表达越高。2.相关性分析：(1)模型组NRK-52E细胞的PHB1、PHB2mRNA表达与细胞培养上清液MDA含量均呈显著负相关(r=-0.89、-0.94,p<0.05)；(2)模型组NRK-52E细胞的PHB1、PHB2mRNA表达与TGF-β1mRNA表达均显著呈负相关(r=-0.97、-0.99,p<0.05)；(3)模型组NRK-52E细胞的PHB1、PHB2mRNA表达与细胞凋亡率均呈显著负相关(r=-0.85、-0.89,p<0.01)；(4)模型组TGF-β1mRNA表达与细胞培养上清液MDA含量、细胞凋亡率均呈显著正相关(r=0.91、0.92,p<0.01)结论在缺氧性RTEC损伤模型中,NRK-52E细胞PHB1和PHB2表达降低与细胞损伤程度密切相关,缺氧时间越长,PHBl和PHB2表达越低,NRK-52E细胞损伤越重,提示PHBl和PHB2可能参与RTEC损伤的发生发展。
