本研究论文主要分为两部分：一、如意珍宝片对脑缺血大鼠运动功能障碍的改善作用；二、盐酸度洛西汀对大鼠应激性胃溃疡的保护作用机制研究一、如意珍宝片对脑缺血大鼠运动功能障碍的改善作用本研究的目的是考察如意珍宝片对局灶性脑缺血大鼠运动功能障碍的影响,并初步探讨其可能的作用机制。采用线栓法永久性阻断大鼠大脑中动脉致局灶性脑缺血(pMCAO),术前连续3d给予如意珍宝片(i.g.),术后长期连续给药,脑缺血24 h后进行动物神经行为评分,E LISA法测定缺血侧脑组织匀浆中TNFa的含量变化,分别于术后不同时间点进行加速转棍实验、平衡木实验、步态实验和开阔场实验评估脑缺血大鼠的运动功能变化,术后42 d进行TTC染色评估缺血大鼠脑梗死体积的变化。结果显示,与模型组相比,脑缺血24 h后如意珍宝片0.5 g·kg-1组和1.0 g·kg-1组大鼠神经行为评分分别下降14%和17%,缺血侧脑组织匀浆中TNFa含量分别减少21%和55%；如意珍宝1.0 g-kg1组大鼠术后8、14、21、28、42 d加速转棍持续时间分别延长50%、33%、47%、46%、159%(P<0.05),术后20 d平衡木持续时间延长71%(P<0.05),术后24 d步态实验中大鼠后肢步宽明显缩短24%(P<0.05),术后28 d自主活动总路程无明显变化,术后42 d脑梗死体积减少41%(P<0.05)。以上结果表明,长期连续灌胃给予如意珍宝片,可显著改善大鼠脑缺血后的运动功能障碍,且这种改善作用可能与降低脑组织中的炎症反应有关。二、盐酸度洛西汀对大鼠应激性胃溃疡的保护作用机制研究本实验室前期研究结果显示,盐酸度洛西汀对大鼠应激性胃溃疡具有显著的保护作用,本研究的目的是分别从氧化应激、炎症、HPA轴等三个方向探讨盐酸度洛西汀对大鼠应激性胃溃疡的保护作用机制。采用水浸拘束应激(W1RS)致大鼠应激性胃溃疡,水浸拘束应激6h后进行大鼠胃黏膜PAS染色评估胃黏膜黏液屏障变化；生化法测定水浸拘束应激6h后大鼠胃黏膜中还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、总一氧化氮(NO)的含量,以及过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)的活性；ELISA法测定水浸拘束应激6h后大鼠胃黏膜中TNFα、IL-1β、ICAM-1和NAP-2/CXCL7的含量；Western Blot法测定水浸拘束应激6h后大鼠下丘脑中pCREB/CREB. pERK/ERK和pJNK/JNK的表达水平。结果显示,(1)与正常组相比,水浸拘束应激6h后大鼠胃黏膜PAS染色阳性层显著减少并出现断裂,胃黏膜失去完整性和连续性,提示应激后大鼠胃黏膜糖黏蛋白含量降低,胃黏液屏障破坏,胃黏膜出现严重损伤；预先给予盐酸度洛西汀(20mg·kg-1, i.p.)可显著增加胃黏膜PAS染色阳性层厚度,且黏膜保持连续和完整,有效逆转WIRS所致的大鼠胃黏膜损伤；(2)与正常组相比,水浸拘束应激6h后大鼠胃黏膜内GSH含量降低23%(P<0.05),NO含量减少75%(P<0.001),MDA含量增加52%(P<0.01),SOD活性降低19%(P<0.05),GSH-Px活性降低19%(P>0.05),CAT活性升高22%(P<0.05)；预先给予盐酸度洛西汀(20 mg·kg-1, i.p.)后,WIRS大鼠胃黏膜中NO含量增加85%(P<0.001),MDA含量减少104%(P<0.01),CAT活性降低160%(P<0.001),SOD活性升高71%(P<0.05),但对GSH含量及GSH-Px活性无明显影响；(3)与正常组相比,水浸拘束应激6h后,大鼠胃黏膜内MPO活性增加47%(P<0.001),TNFα含量增加62%(P<0.05),IL-1p含量增加42%(P<0.05),ICAM-1含量增加58%(P<0.01),NAP-2/CXCL7含量增加65%(P<0.05)；预先给予盐酸度洛西汀(20 mg·kg-1,i.p.)后,WIRS大鼠胃黏膜中MPO活性降低54%(P<0.01),TNFa含量降低81%(P<0.05),IL-1β含量降低74%(P<0.05),ICAM-1含量降低84%(P<0.01),NAP-2/CXCL7含量降低79%(P<0.05)；(4)与正常组相比,水浸拘束应激6 h后大鼠下丘脑中CREB、ERK和JNK磷酸化水平均显著增加,其总蛋白表达无明显变化；预先给予盐酸度洛西汀(20 mg·kg-1,i.p.)可显著降低WIRS大鼠下丘脑CREB和ERK磷酸化水平,但对JNK磷酸化水平无明显影响,且不影响CREB、ERK和JNK总蛋白的表达水平。以上结果表明,预先给予盐酸度洛西汀(20 mg·kg-1,i.p.)可维持WIRS后大鼠胃黏膜屏障的连续性和完整性,保护应激所致的大鼠胃黏膜损伤,这种保护作用可能是通过抑制氧化应激反应、抑制中性粒细胞的激活、降低中性粒细胞-内皮细胞的黏附及抑制HPA轴的活性而实现的,而且盐酸度洛西汀可能是通过抑制下丘脑中ERK磷酸化,进而抑制CREB的磷酸化激活,从而最终调节CRF mRNA表达而实现对HPA轴的抑制,从而发挥对胃黏膜的保护作用。
