植物源病毒抑制剂VFB活性成分研究及抗TMV植物样品筛选
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从植物中寻找抗病毒活性物质是目前植物病毒抑制剂创制和开发的重要方向。为了给新型植物源病毒抑制剂的开发提供线索和理论依据,本论文主要进行了以下三个方面的研究:一是采用现代分离技术,结合活性跟踪对植物源病毒抑制剂VFB中活性成分进行了分离、纯化和结构鉴定;二是采用半叶枯斑法、整株法和漂浮叶圆片法较为系统的评价了我国西北地区74科214种313个植物样品乙醇提取物的抗TMV活性;三是以筛选出的植物样品为材料,初步研究了其对VFB水剂抗病毒活性的增效作用,得出了以下主要研究结果:1.采用活性跟踪法从VFB中分离得到了15个化合物,最终鉴定出其中12个化合物的化学结构,分别为:3,4,5-三羟基-苯甲酸甲酯(Methyl gallate)、β-谷甾醇(β-Sitosterol)、7-甲基香豆素(7-methoxycoumarin)、β-香树酯醇(β-Amyrin)、大黄素(Emodin)、甘草素(Liquiritigenin)、熊果酸(Ursolic Acid)、牛蒡子苷(Arctiin)、4-[(2S,3R,4S)-4-[(S)-(3,4-二甲氧苯基)羟甲基]四氢-3-(羟甲基)-2-呋喃基]-2-甲氧苯基(4-[(2S,3R,4S)-4-[(S)-(3,4-dimethoxyphenyl)hydroxymethyl]tetrahydro-3-(hydroxymethyl)-2-furanyl]-2-methoxyphenyl)、槲皮素(Quercetin)、5-(3′,4′-二甲氧基苯基)-3-(β-(3′,4′-二甲氧基苯基)-α-羟基)-2H呋喃-4-羟基-4甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷(5-(3′,4′-dimethoxyphenyl)-3-(β-(3′,4′-dimethoxyphenyl)-α-hydroxy)-2Hfuran-4-hydroxy-4methyl--β-D-glucopyranoside)和2-羰基-3-(3′,4′-二羟苯乙基)-5H-呋喃-4-(4′-对甲氧基苯乙基-3′-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(2-oxo-3-(3’,4’-dihydroxyphenylethyl)-5H-furan-4-(4’-p-methoxyphenylethyl-3’-O-α-L-rhamnylpyranylo-syl (1-2)-β-D-glucopyranoside),其余3个化合物的化学结构有待进一步鉴定。2.采用半叶枯斑法和漂浮叶圆片法系统的研究了15个化合物对TMV的抑制活性,结果表明,在1mg/mL的剂量下,甘草素和熊果酸在不同寄主上对TMV病毒粒体均有很好的抑制活性,甘草素和熊果酸既能强烈的体外钝化TMV病毒粒子,其钝化效果分别为54.20%和41.00%;又能较好的预防TMV对寄主的侵染,其抑制率分别为48.52%和45.73%;且对TMV在普通烟植株内的增殖有一定的抑制作用,其抑制率均在33.00%以上,故推断甘草素和熊果酸可能为植物源病毒抑制剂VFB中主要抗病毒活性物质。3.采用半叶枯斑法测试了313个供试植物样品95%乙醇提取物对TMV病毒粒体的体外抑制作用,发现有27个科48种54个植物粗提物对TMV具有良好的体外钝化活性,其抑制率均在50%以上。在此基础上,采用整株法和漂浮叶圆片法进一步测定了这54个样品对TMV预防和增殖的抑制活性,其中仅有宽果红景天、糯米条、粗榧、牛心朴子草、臭椿和雷丸等6种样品能有效的抑制TMV的侵染和增殖,其抑制率均在50%以上。综合分析认为,宽果红景天、糯米条、粗榧、牛心朴子草、臭椿和雷丸6种样品的抗TMV作用显著,其抗植物病毒活性值得进一步研究。4.初步研究了宽果红景天、糯米条、粗榧、牛心朴子草、臭椿和雷丸6种植物提取物对VFB水剂抗病毒活性的增效作用,结果表明雷丸提取物对VFB水剂表现出明显的增效作用。植物中具抗植物病毒活性的物质含量丰富、种类繁多,其结构独特,且相互之间存在着极其复杂的互作关系。因此,植物界是发现低毒、低残留、高效及环境和谐的新抗病毒剂和新抗病毒化合物的最好的自然资源宝库。本试验研究结果对我国植物资源的合理开发利用及开发自主知识产权的农药都具有一定的理论意义和应用价值。
摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
第一章 文献综述 | 第13-39页 |
1.1 植物病毒病对农业生产的危害性及其防治中存在的问题 | 第13页 |
1.2 植物病毒病主要防治策略 | 第13-15页 |
1.3 植物病毒抑制物的种类及其研究现状 | 第15-32页 |
1.3.1 化学合成的抗植物病毒物质种类及其研究现状 | 第15-18页 |
1.3.2 植物源抗病毒物质研究现状 | 第18-27页 |
1.3.3 微生物源抗植物病毒物质研究进展 | 第27-31页 |
1.3.4 动物源和矿物源抗植物病毒物质研究进展 | 第31-32页 |
1.4 天然源抗植物病毒物质作用机理研究进展 | 第32-34页 |
1.4.1 直接作用于病毒本身 | 第32-33页 |
1.4.2 直接作用于寄主植物 | 第33-34页 |
1.5 抗植物病毒物质的筛选模式及药效评价指标研究进展 | 第34-35页 |
1.6 抗植物病毒物质研究中存在的问题 | 第35-36页 |
1.7 植物源农药 VFB 的研究现状及存在问题 | 第36-37页 |
1.7.1 植物源农药 VFB 的研究现状 | 第36-37页 |
1.7.2 植物源病毒抑制剂 VFB 研发中存在的问题 | 第37页 |
1.8 问题的提出及论文设计思路 | 第37-39页 |
第二章 抗烟草花叶病毒活性植物样品筛选 | 第39-64页 |
2.1 材料与方法 | 第39-43页 |
2.1.1 材料 | 第39-40页 |
2.1.2 试验方法 | 第40-43页 |
2.2 结果与分析 | 第43-58页 |
2.2.1 提纯病毒的浓度 | 第43页 |
2.2.2 供试植物提取物对 TMV 病毒粒子体外钝化效果 | 第43-54页 |
2.2.3 供试植物提取物对 TMV 侵染心叶烟的预防效果 | 第54-56页 |
2.2.4 供试植物提取物在普通烟 K326上对 TMV 增殖的抑制效果 | 第56-58页 |
2.3 小结与讨论 | 第58-64页 |
2.3.1 小结 | 第58-60页 |
2.3.2 讨论 | 第60-64页 |
第三章 植物源病毒抑制剂 VFB 活性成分分离 | 第64-80页 |
3.1 材料与方法 | 第64-66页 |
3.1.1 材料 | 第64-65页 |
3.1.2 试验方法 | 第65-66页 |
3.2 结果与分析 | 第66-78页 |
3.2.1 VFB 制剂大孔吸附树脂分离及各馏分段对 TMV 的钝化作用 | 第66-67页 |
3.2.2 50%乙醇洗脱段系统溶剂萃取及各萃取相对 TMV 的钝化活性测定 | 第67-68页 |
3.2.3 乙酸乙酯萃取相经硅胶吸附后依次用有机溶剂超声提取及各提取物对TMV 的体外钝化活性测定 | 第68-69页 |
3.2.4 乙酸乙酯超声提取物中抗 TMV 活性成分分离纯化 | 第69-70页 |
3.2.5 分离出的化合物的结构鉴定结果 | 第70-78页 |
3.3 小结与讨论 | 第78-80页 |
3.3.1 植物源病毒抑制剂 VFB 中活性成分分离及鉴定结果分析 | 第78-79页 |
3.3.2 植物源病毒抑制剂 VFB 中抗病毒活性物质值得进一步研究 | 第79页 |
3.3.3 植物源病毒抑制剂 VFB 中低极性段组分是否具有抗病毒活性值得研究 | 第79页 |
3.3.4 本研究中对 VFB 制剂活性成分分离的一些方法值得借鉴 | 第79-80页 |
第四章 VFB 中单体化合物抗 TMV 活性研究 | 第80-89页 |
4.1 材料与方法 | 第80-81页 |
4.1.1 材料 | 第80-81页 |
4.1.2 试验方法 | 第81页 |
4.2 结果与分析 | 第81-85页 |
4.2.1 供试单体化合在心叶烟上对 TMV 抑制活性测定结果 | 第81-84页 |
4.2.2 供试单体化合对 TMV 在普通烟上增殖的抑制作用测定结果 | 第84-85页 |
4.3 小结与讨论 | 第85-89页 |
4.3.1 小结 | 第85-86页 |
4.3.2 讨论 | 第86-89页 |
第五章 VFB 水剂与六种植物样品提取物复配增效研究 | 第89-94页 |
5.1 材料与方法 | 第89-90页 |
5.1.1 材料 | 第89-90页 |
5.1.2 试验方法 | 第90页 |
5.2 结果与分析 | 第90-92页 |
5.2.1 供试样品在心叶烟上对 TMV 体外钝化活性测定结果 | 第90页 |
5.2.2 供试样品在心叶烟上对 TMV 侵染心叶烟的预防作用测定结果 | 第90-91页 |
5.2.3 供试样品在心叶烟上对 TMV 增殖的抑制作用测定结果 | 第91-92页 |
5.3 小结与讨论 | 第92-94页 |
5.3.1 小结 | 第92页 |
5.3.2 讨论 | 第92-94页 |
第六章 结论与讨论 | 第94-101页 |
6.1 主要结论 | 第94-95页 |
6.2 本研究的创新点 | 第95页 |
6.3 讨论 | 第95-99页 |
6.4 有待进一步研究的问题 | 第99-101页 |
参考文献 | 第101-112页 |
附图 部分化合物的结构鉴定图谱 | 第112-129页 |
致谢 | 第129-130页 |
作者简介 | 第130页 |
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