玉米内州萎蔫病菌和玉米细菌性枯萎病菌是两种造成严重农业经济损失的植物病原菌。目前,检测这两种病原菌的方法主要有分离培养检测、酶联免疫法、PCR,但由于耗时冗长或需要特殊的仪器设备及技术人员,难以满足现场快速筛查的要求。胶体金免疫层析技术具有操作简单、快捷、判断直观等优点已逐渐应用于致病菌的快速检测,但检测灵敏度相对不高。本研究针对玉米内州萎蔫病菌和玉米细菌性枯萎病菌胶体金免疫层析检测方法存在的问题,运用纳米颗粒胶体金增敏的方法,建立了两种植物致病菌的快速、灵敏的检测技术,取得了如下成果。1.采用改良的柠檬酸三钠还原法,成功确立了40nm胶体金的制备条件；并利用制备好的胶体金,对抗玉米内州萎蔫病菌单克隆抗体(4G12)、抗玉米细菌性枯萎病菌单克隆抗体(2F5)进行了胶体金标记条件的摸索,确立了单克隆抗体的胶体金标记条件：最适pH值为8.0～8.5,最适标记量分别为30μg/mL胶体金、15μg/mL胶体金,并制备了相应的金标抗体。2.以胶体金标记抗玉米内州萎蔫病菌单克隆抗体4G12作为示踪物,用固定在检测线上的抗玉米内州萎蔫病菌单克隆抗体4H4作为捕获抗体,采用双抗体夹心法,成功制备了玉米内州萎蔫病菌胶体金免疫层析快速检测试纸条。用制备好的试纸条检测玉米内州萎蔫病菌标准菌株时,检测线出现明显的红色条带,而空白对照呈阴性反应,灵敏度增敏前为106cfu/mL、增敏后为105cfu/mL,比双抗体夹心ELISA法灵敏度高一个数量级。与其它9株不同属不同种、同属不同种的植物病菌交叉性反应得出该试纸条特异性良好,重复性、稳定性也良好。实验结果证明,本方法特异性强,灵敏度高,且操作简便、结果判定直观,可以用于玉米内州萎蔫病菌的快速检测及鉴别诊断。3.以胶体金标记抗玉米细菌性枯萎病菌单克隆抗体2F5作为示踪物,用固定在检测线上的抗玉米细菌性枯萎病菌多克隆抗体作为捕获抗体,采用双抗体夹心法,制备了玉米细菌性枯萎病菌胶体金免疫层析快速检测试纸条。条件优化后的试纸条用于玉米细菌性枯萎病菌的检测,灵敏度增敏前为106cfu//mL/增敏后为104cfu/mL,灵敏度提高了100倍；交叉试验结果表明,该试纸条对玉米细菌性枯萎病菌有良好的特异性。本文提供了玉米细菌性枯萎病菌日常监测的现场筛查手段,简便、快速、成本低廉,便于普及,为保障我国农产品安全具有重要的现实意义。
