鹿茸多肽的提取分离及其促进成骨细胞增殖作用的研究

鹿茸多肽论文 分离纯化论文 OS-732细胞论文
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鹿茸系鹿科动物梅花鹿(Cervus Nippon Temminck)或马鹿(Cervus elaphus Linnaeus)的雄鹿未骨化密生绒毛的幼角。中医主要用其治疗虚劳赢瘦、腰膝酸痛、心悸耳鸣、阳痰滑精、子宫虚冷、崩漏带下等症。鹿茸中含有多种生物活性物质能够促进机体的生长发育和新陈代谢,增强机体的免疫功能,对神经系统、心血管系统有良好的调节作用,有助于恢复和保持机体健康。本文采用水溶液提取法从新鲜梅花鹿鹿茸中提取出鹿茸多肽,然后经Sephadex-G-25葡聚糖凝胶层析和制备型高效液相色谱柱分离纯化,得到一系列分子量小于800u的小肽。采用MTT法检测鹿茸多肽对人成骨肉瘤细胞(OS-732)细胞的增殖活性的影响。结果表明鹿茸多肽能明显促进OS-732细胞的增殖。改良Gomori钙-钴法显示碱性磷酸酶,结果显示鹿茸多肽促进OS-732细胞增殖的同时,碱性磷酸酶的表达也明显提高。同时采用流式细胞仪检测鹿茸多肽作用OS-732细胞后的细胞周期变化,结果表明鹿茸多肽作用后OS-732细胞其S期所占的百分比明显高于对照组,说明鹿茸多肽对OS-732细胞有非常明显的增殖促进作用。本研究为开发鹿茸治疗骨质疏松症药物的研究提供了实验依据。
内容提要第4-7页
前言第7-20页
    一、鹿茸的药理活性第7-12页
        1、心血管系统第7-8页
        2、神经组织第8页
        3、免疫系统第8页
        4、对遗传的作用第8页
        5、骨骼系统第8-10页
        6、抗氧化作用第10-11页
        7、促皮肤组织愈合、抗炎作用第11页
        8、性功能的影响第11-12页
        9、不良反应第12页
    二、鹿茸的化学成分第12-14页
        1、氨基酸类第12页
        2、蛋白质多肽类物质第12-13页
        3、脂类第13页
        4、糖类第13-14页
        5、甾体类化合物第14页
        6、无机盐及其它类第14页
    三、鹿茸与骨细胞代谢、骨质疏松的关系第14-20页
        1、骨细胞第14-15页
        2、骨质疏松第15-20页
实验材料与仪器第20-23页
    一、鹿茸第20页
    二、主要试剂第20页
    三、主要实验仪器第20-23页
实验方法第23-37页
    一、鹿茸多肽的制备第23-24页
        1、鹿茸多肽的提取第23页
        2、鹿茸多肽的Sephadex G-25 层析第23-24页
        3、鹿茸多肽的制备型HPLC纯化第24页
    二、鹿茸多肽的鉴定第24-27页
        1、鹿茸多肽的定性检测采用双缩脲试剂检测第24页
        2、鹿茸多肽的蛋白含量测定采用Folin-酚法检测第24-26页
        3、鹿茸多肽的纯度检测采用HPLC法第26页
        4、鹿茸多肽的分子量鉴定采用电喷雾质谱法第26-27页
    三、鹿茸多肽的活性检测第27-37页
        1、细胞培养第27-33页
        2、四唑盐比色试验(MTT试验)第33-34页
        3、改良Gomori钙-钴法显示碱性磷酸酶第34-35页
        4、流式细胞仪检测细胞周期第35-37页
结果和讨论第37-50页
    一、鹿茸多肽的制备、分离纯化第37-39页
        1、鹿茸总多肽的提取第37-38页
        2、鹿茸多肽B(VAP-B)的纯化第38-39页
    二、鹿茸多肽的检测、鉴定第39-43页
        1、鹿茸多肽的双缩脲反应第39页
        2、Folin-酚测定蛋白质浓度第39-40页
        3、鹿茸多肽的含量检测采用HPLC法第40-41页
        4、相对分子量采用电喷雾质谱法检测第41-43页
    三、鹿茸多肽的活性检测第43-50页
        1、鹿茸多肽对人成骨肉瘤细胞OS-732 增殖的影响第43-45页
        2、鹿茸多肽对碱性磷酸酶的影响第45-47页
        3、流式细胞仪分析细胞周期第47-50页
参考文献第50-59页
摘要第59-61页
Abstract第61-62页
致谢第63页
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