核盘菌对二甲酰亚胺类杀菌剂菌核净的抗性机理研究

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油菜菌核病是危害油菜生产的重要真菌性病害病,能降低油菜籽的产量和质量。二甲酰亚胺类杀菌剂菌核净被广泛运用于防治该病,但目前其作用机制及抗性机制并不明确。本研究中,我们得到了一个野生型抗性菌株HN456-1-JBJ,三个抗性突变体FD47R、HT84R、LA50R,这四个抗性菌株EC50值分别为HN456-1-JBJ56.55μg/ml, FD47R9.24μg/ml, HT84R95.51μg/ml, LA50R94.87μg/ml。抗性菌株的EC50值均远远高于敏感菌株的EC50值,且它们的抗性水平各不相同。不用药剂处理时,与敏感菌株相比,所有的抗性菌株均表现为对渗透压、过氧化物敏感,而且具有低致病性。而且,从抗性菌株细胞中流出的电解质更多。对抗性菌株基因的研究发现,抗性菌株FD47R双组份组氨酸激酶(HK)基因(参与高渗甘油途径)存在V238A点突变,HN456-1-JBJ菌株H-IK基因完全不表达。因此,通过这些对抗性菌株表型和基因的研究结果,我们初步认为菌核净抗性与高渗甘油途径(High Osmolarity Glycerol,HOG)中的相关基因功能的缺失有关。
摘要第7-8页
Abstract第8页
第一章 文献综述第9-19页
    1 油菜菌核病及其危害第9-10页
    2 核盘菌的生物学特性第10页
    3 油菜菌核病的农业防治第10-11页
    4 油菜菌核病的生物防治第11-13页
    5 核盘菌的药剂防治第13-16页
        5.1 苯并咪唑氨基甲酸酯类杀菌剂(MBC)第13-15页
        5.2 戊唑醇第15页
        5.3 二甲酰亚胺类杀菌剂(DCFs)第15-16页
    6 高渗甘油途径第16-17页
    7 立论依据及本研究的意义第17-19页
第二章 菌核净敏感及抗性菌株生物学特性观察第19-27页
    1 材料与方法第19-21页
        1.1 实验材料第19-20页
            1.1.1 实验菌株及油菜品种第19页
            1.1.2 实验药品第19页
            1.1.3 培养基第19-20页
        1.2 实验方法第20-21页
            1.2.1 各菌株菌丝生长速率及产菌核能力测定第20页
            1.2.2 各菌株EC_(50)值的测定第20页
            1.2.3 各菌株致病性测定第20-21页
    2 结果与分析第21-26页
        2.1 各菌株菌丝48小时生长情况第21-22页
        2.2 各菌株产菌核能力第22-23页
        2.3 各菌株的EC_(50)值第23-25页
        2.4 各菌株致病性测定结果第25-26页
    3 小结与讨论第26-27页
第三章 菌核净敏感及抗性菌株对渗透压和氧化压力的敏感性第27-39页
    1 材料与方法第27-29页
        1.1 实验菌株、试剂与培养基第27页
        1.2 实验方法第27-29页
            1.2.1 不同盐浓度对各菌株的影响第27-28页
            1.2.2 不同甘油浓度对各菌株的影响第28页
            1.2.3 不同糖浓度对各菌株的影响第28页
            1.2.4 不同双氧水浓度对各菌株的影响第28页
            1.2.5 核盘菌野生菌株和突变菌株菌丝外电导率的测定第28-29页
    2 结果与分析第29-37页
        2.1 各菌株对氯化钠的敏感性第29-30页
        2.2 各菌株对甘油的敏感性第30-31页
        2.3 各菌株对蔗糖和葡萄糖的敏感性第31-35页
        2.4 各菌株对双氧水的敏感性第35-36页
        2.5 各菌株菌丝表面电导率测定第36-37页
    3 小结与讨论第37-39页
第四章 核盘菌中菌核净抗性基因的克隆和表达分析第39-51页
    1 材料与方法第39-44页
        1.1 实验材料第39-40页
            1.1.1 实验菌株与培养基第39-40页
            1.1.2 实验所用药品、试剂第40页
        1.2 实验方法第40-44页
            1.2.1 真菌总DNA的提取第40-41页
            1.2.2 抗性相关基因片段的扩增,回收及测序第41页
            1.2.3 各菌株RNA提取菌丝样品的准备第41-42页
            1.2.4 提取菌丝样本RNA方法第42-43页
            1.2.5 各菌株cDNA的获得第43页
            1.2.6 实时荧光定量PCR第43-44页
    2 结果与分析第44-48页
        2.1 HOG途径相关基因扩增及其测序结果第44-45页
        2.2 实时荧光定量PCR反应结果第45-48页
    3 小结与讨论第48-51页
第五章 全文总结及展望第51-54页
参考文献第54-63页
致谢第63页
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